目前，臨床主要依賴新鮮GP. Mur表型新鮮紅細(xì)胞來(lái)檢測(cè)抗-“Mur”，但該方法不能區(qū)分抗-Mia和抗-Mur，同時(shí)紅細(xì)胞保存時(shí)間短且難以獲得，這限制了臨床抗-Mia和抗-Mur檢測(cè)工作的開(kāi)展。對(duì)此，中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所李勇研究員帶領(lǐng)的血液免疫學(xué)與免疫遺傳學(xué)研究組經(jīng)過(guò)技術(shù)攻關(guān)，成功建立了不依賴GP. Mur表型紅細(xì)胞的抗-Mia及抗-Mur檢測(cè)固相免疫吸附實(shí)驗(yàn)技術(shù)。首先，合成生物素標(biāo)記的Mia及Mur血型抗原多肽，經(jīng)凝集抑制試驗(yàn)并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)確認(rèn)其抗原特異性后，通過(guò)親和素固定于U型微孔板孔內(nèi)作為反應(yīng)板。同時(shí)，將抗球蛋白和人IgG致敏紅細(xì)胞作為指示系統(tǒng)以建立抗-Mia及抗-Mur檢測(cè)固相免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)。結(jié)果表明，采用該方法與試管法血凝試驗(yàn)結(jié)果一致。此外，為提高檢測(cè)敏感性，研究人員在特異性多肽序列 5’端前添加“GGDGDGDGDG”序列以延長(zhǎng)多肽抗原長(zhǎng)度，提高了多肽在微孔板中的結(jié)合率。該方法靈敏度高于試管法，克服了傳統(tǒng)紅細(xì)胞試劑保存時(shí)間短、抗原譜不明確且難以獲得的缺點(diǎn)，適合于大標(biāo)本和自動(dòng)化檢測(cè)，為臨床抗-Mia和抗-Mur的檢測(cè)和鑒定及配血工作提供有效的參考。相關(guān)結(jié)果已發(fā)表于《中國(guó)輸血雜志》（2014 ,7(3):248-250）。

　　同時(shí)，研究人員在試驗(yàn)過(guò)程中還建立了納米磁珠免疫分析技術(shù)，以應(yīng)用于檢測(cè)人紅細(xì)胞血型Mia(MNS7)抗體。利用水熱合成法合成納米磁珠，在其表面包被二氧化硅層，提高磁性復(fù)合微粒的分散性；并進(jìn)行3-氨丙基三乙氧基硅烷( APTES)氨基化修飾，磁性顆粒表面的氨基可以進(jìn)一步偶聯(lián)合成的Mia抗原多肽；利用碳酰二亞胺鹽(EDC)分別將人免疫球蛋白G (IgG)及牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)于磁珠表面，優(yōu)化偶聯(lián)條件，并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光標(biāo)記的抗IgG來(lái)評(píng)價(jià)偶聯(lián)效果；將人紅細(xì)胞Milternberger亞血型Mia(MNS7)抗原多肽偶聯(lián)于磁珠表面，檢測(cè)血清中的抗體，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖所示。利用Mia多肽免疫磁珠檢測(cè)200例人血清標(biāo)本，結(jié)果與臨床常用的新鮮GP. Mur表型紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果一致，初步證明此免疫磁珠檢測(cè)系統(tǒng)用于篩檢人血清抗-Mia的有效性，有望為臨床提供一種有效的抗體檢測(cè)方法，解決目前臨床上該抗體檢測(cè)試劑缺乏的難題。相關(guān)結(jié)果已發(fā)表于《中國(guó)輸血雜志》（2014 ,7(3):244-247）。

　　以上研究獲得江蘇省自然科學(xué)基金青年基金(BK20130343)、蘇州市醫(yī)療器械與新醫(yī)藥專項(xiàng)基金(ZXY2013017)的支持。

 

  熒光二抗檢測(cè)Mia多肽免疫磁珠的流式細(xì)胞圖。（a）Fe3O4-NH2+陽(yáng)性血清+Anti-Ig(G,A,M)-FITC(空白對(duì)照)；（b）Fe3O4-Mia+陰性血清+Anti-Ig(G,A,M)-FITC(陰性對(duì)照)；（c）Fe3O4-Mia+陽(yáng)性血清+ Anti-Ig(G,A,M)-FITC。