近日，Nature Publishing Group （NPG）下的國際學術期刊Cell Death & Disease 發(fā)表了中國科學院深圳先進技術研究院醫(yī)藥所抗體藥物中心阮慶國研究小組的最新成果：微小RNA-21通過靶向抑癌基因Tipe2來調控T細胞凋亡。
微小RNA（MicroRNAs, miRNA）是一類短鏈非編碼RNA（約22個核苷酸），可以與mRNA中與其配對的互補序列結合，使mRNA發(fā)生降解或抑制蛋白翻譯，從而導致由mRNA編碼的蛋白質減少。MiR-21是miRNA中的一員，在乳腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌和胰腺癌等多種實體腫瘤中明顯過量表達，在多種細胞類型中起抗凋亡作用。最近的研究表明，miR-21可以抑制鼠和人類原代T細胞的凋亡并調節(jié)細胞因子的合成，然而其分子機制仍不清楚。
為了探討NF-κB和miR-21抑制細胞凋亡的分子機制，阮慶國研究小組對缺失Tipe2（亦稱腫瘤壞死因子-α誘導蛋白8-類似蛋白2（TNFAIP8L2））的T 淋巴細胞的凋亡進行了分析，發(fā)現(xiàn)Tipe2作為一種“分子橋”把miR-21與細胞凋亡聯(lián)系起來，miR-21（至少部分）通過直接靶向腫瘤抑制基因Tipe2從而抑制T淋巴細胞的細胞凋亡。該研究結果揭示了NF-κB、miR-21和Tipe2三個因子調控T細胞凋亡的特異性通路，這將為開發(fā)調控細胞凋亡的新途徑提供理論依據(jù)。
該研究獲得深圳市新一代單抗藥物孔雀團隊和深圳市科創(chuàng)委基礎研究等項目資助。
圖1 NF-kB通過miR-21–Tipe2軸抑制活化誘導的T細胞凋亡。TCR和抗CD28抗體通過IKK刺激NF-kB的活化（通過降解抑制蛋白IkB）�；罨驨F-kB轉移到細胞核內并啟動目標基因，包括miR-21。MiR-21通過降解Tipe2從而抑制活化誘導的T細胞凋亡。
圖2 MiR-21通過編碼區(qū)依賴的方式靶向Tipe2。 (A) 熒光素報告實驗確認miR-21的假定結合位點。(B)小鼠Tipe2編碼區(qū)中預測的miR-21結合位點及其突變策略。“X”表示突變位點。 (C) 熒光素報告實驗分析WT和miR-21結合位點突變的Tipe2編碼區(qū)。“X”表示突變位點。*P<0.02。以上數(shù)據(jù)代表三次獨立實驗。
圖3 miR-21通過Tipe2調控T細胞凋亡。(A)從WT和Tipe2 -/- 小鼠(n=3)分離脾初始CD4+T 細胞并分別用板結合的抗CD3抗體 (1mg/ml)和可溶性抗CD28抗體(1mg/ml)處理或不處理。細胞用annexin V 和7AAD染色，通過流式細胞術分析細胞凋亡的程度。 (B) 用miR-21相似物或陰性對照與Tipe2過表達的載體或空載體共轉染EL4細胞。24h以后，分別用板結合的抗CD3抗體 (1mg/ml)和可溶性抗CD28抗體(1mg/ml)處理或不處理，細胞用annexin V 和7AAD染色，通過流式細胞術分析細胞凋亡的程度。*P<0.01。以上數(shù)據(jù)代表三次獨立實驗。
